松花粉多糖实验室提取技术规程

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标准简介

ICS 62.020.01 B05 DB37 山东省地方标准 DB37/T 3995—2020 松花粉多糖实验室提取技术规程 Technical specification for laboratory extraction of pine pollen polysaccharides 2020-06-08发布 2020-07-08实施 山东省市场监督管理局 发布 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东农业大学、山东省动物疫病预防与控制中心。 本标准主要起草人：朱瑞良、魏凯、黄河、胡莉萍、杨萍萍、楚遵锋、刘宴博、崔莉、汪洋、徐启杰、陈峰。 松花粉多糖实验室提取技术规程 1 范围 本标准规定了松花粉中松花粉多糖的实验室提取及测定方法。 本标准适用于松花粉中松花粉多糖的提取和测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。 3.1 水：符合GB/T 6682的规定的三级水。 3.2 乙醚。 3.3 胃蛋白酶。 3.4 Sevag试剂，配制方法见附录A。 3.5 无水乙醇。 3.6 磷酸盐缓冲溶液（PBS），配制方法见附录A。 3.7 葡萄糖对照品，纯度≥99%。 3.8 浓硫酸。 3.9 苯酚。 4 仪器设备 4.1 260目筛网。 4.2 恒温干燥箱。 4.3 超微粉碎机。 4.4 电子天平：精度0.001 g。 4.5 索氏提取器。 4.6 水浴锅。 4.7 高速离心机：转速不小于16000 r/min。 4.8 旋转蒸发仪。 4.9 真空干燥器。 4.10 移液器：10 μL～1000 μL。 4.11 振荡器。 4.12 分光光度计：波长范围380 nm～780 nm。 4.13 pH计。 5 松花粉的准备 于每年四、五月份采集松树的花粉，过260目筛网筛除杂质，放入恒温干燥箱中于70 ℃烘干，用超微粉碎机破壁。 6 泰山松花粉多糖的提取 6.1 除脂 破壁松花粉用脱脂滤纸分装成20 g独立小包，置于索氏提取器中，用乙醚回流抽提脂肪4 h，将除脂后的松花粉收集到烧杯中。 6.2 浸提 将除脂的松花粉与去离子水按1:10比例置于1000 mL烧杯中混合均匀，并加入0.3%的胃蛋白酶。将烧杯置于恒温水浴锅中，于50 ℃让松花粉与胃蛋白酶充分反应2 h，然后在85 ℃浸提8 h使多糖充分溶出。浸提过程中随时添加去离子水补充蒸发的水分，每30 min搅拌1次。浸提完置于4 ℃冰箱过夜沉淀。 6.3

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